StarSignal化学发光检测试剂盒系在ECL化学发光检测试剂基础上进行优化的二代产品。本试剂反应原理与ECL相同,可由辣根过氧化酶(HRP)催化,产生化学发光反应,用于采用HRP标记的抗体进行的免疫印记反(Western blot)。通过X光片曝光或化学发光滤片照相,可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。本试剂的灵敏度比普通ECL试剂高数百倍,发光稳定性也明显提高,发光检测的有效时间可延长到3~5小时。
用途
• 采用HRP标记的抗体的Western blot检测
特点
• 高灵敏度:检测纳克级表达的蛋白
• 发光时间长:操作方便,避免“牛眼”现象
产品组分及保存条件
| 货号 | E171-01 | E171-02 | 保存条件 |
| Reagent A | 25 ml | 50 ml | 4℃ 避光,有效期6个月 |
| Reagent B | 25 ml | 50 ml |
使用方法
1. 按常规操作进行蛋白电泳、转膜和抗体杂交。
2. 按每10 cm2膜使用0.5 ml Reagent A和0.5 ml Reagent B的比例混合Reagent A和B。
3. 使发光检测液均匀覆盖蛋白印迹膜,室温孵育5分钟。
4. 通过X光片曝光或化学发光滤片照相检测发光信号。
DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒是一种借助辣根过氧化物酶(HRP),用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western blot、Southern blot、Northern blot、EMSA等膜显色的试剂盒。DAB(3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride)是HRP的常用反应底物。在HRP的催化下,DAB会产生不溶于水和乙醇的棕色沉淀。因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。本试剂盒既可以用于Western blot等结合有HRP的膜的显色检测,同时也适用于免疫组化或原位杂交实验中,结合HRP的细胞或组织显色,以及细胞或组织内源性的HRP显色。本试剂盒操作简单快捷,实验结果可用肉眼直接观察,非常适合不具备暗室或特殊成像设备的实验室使用。DAB 溶液为强致癌物,使用时请注意防护,开盖前需离心,避免沾染。
用途
• 采用HRP标记的抗体的Western blot检测
• 采用HRP标记的免疫组化或原位杂交实验
特点
• 适用范围广:HRP标记的组织或细胞显色,HRP标记的印迹膜显色
• 简单快捷:显色快,肉眼观察,不需要暗室或特殊照相设备
产品组分及保存条件
| 试剂名称 | 总量 | 保存条件 |
| DAB Reagent A | 4.5 ml | -20℃ 避光保存一年 |
| DAB Reagent B | 1 ml |
使用方法
1. 漂洗:
a) 对于组织切片、细胞样品或印迹膜,在与HRP标记的抗体或探针孵育后,用相应的漂洗液漂洗3~5次,每次3~5分钟;
b) 对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品,在适当固定后,也用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5分钟;
2. DAB工作液配制:以配制25ml体系为例,向 24.5 ml PBS 中加入0.5 ml的 DAB Reagent A,混匀后加入3-5 μl的DAB Reagent B。工作液请新鲜配制,避光2小时内使用。
3. 在最后一次漂洗完毕后,去除漂洗液;
4. 加入适量DAB染色工作液,确保能充分覆盖样品;
5. 室温避光孵育数分钟至数小时直至显色至预期深度;根据目标物含量的多少可以对DAB Reagent A的使用量进行调整;
6. 去除DAB染色工作液,用蒸馏水漂洗1~2次终止显色反应;
7. 对于组织切片或细胞样品,显色反应终止后,如有必要可用中性红染色液(neutral red staining solution)染色,以便于观察;
8. 对于印迹膜,显色反应终止后,可以室温晾干避光保存。
StarSignal AP Western显色检测试剂盒采用BCIP和NBT为底物,可由标记于二抗上的碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,AP)催化,产生化学显色反应,在蛋白转印膜阳性蛋白条带处形成蓝紫色沉淀,适用于使用AP标记抗体的免疫印记反应(Western blot)。与化学发光类试剂相比,本产品使用方便,可快速获得结果;但检测灵敏度不及化学发光类试剂。用户需根据样品的浓度选择适当的检测试剂。
用途
• 采用AP标记的抗体的Western blot检测
特点
• 膜上显色:操作方便
产品组分及保存条件
| 试剂名称 | 总量 | 保存条件 |
| AP Reaction Buffer | 100 ml | 4℃避光,有效期6个月 |
| BCIP | 1 ml | |
| NBT | 1 ml |
使用方法
1. 按常规操作进行蛋白电泳、转膜和抗体杂交。
2. 按每10 cm2膜使用至少1 ml显色液,以100:1:1的比例依次加入AP Reaction Buffer、BCIP和NBT试剂
(如1 ml Reaction Buffer,10 μl BCIP和10 μl NBT)。
3. 使发光检测液均匀覆盖蛋白印迹膜,室温孵育5~15分钟至蛋白转印膜上的条带呈色明显。
3. 用蒸馏水漂洗膜,晾干。
4. 照相记录蛋白转印膜的图像。
快速蛋白印迹膜染色试剂盒系采用特殊配制的考马斯亮蓝R-250溶液,对转移到PVDF或硝酸纤维素膜上的全部蛋白染色,便于判断转膜效率,并可与化学发光成像结果进行比对,确定目的蛋白的位置和分子量。由于试剂中不含干扰蛋白测序(如Edman降解法)的成分,该试剂盒也可用于蛋白测序样品的准备。
用途
• 对印迹膜上的全部蛋白进行染色,检测转膜效率、确定目的蛋白的分子量
• 对PVDF膜上转印的纯化蛋白进行染色,方便切割,用于蛋白测序特点
• 高效快速:整个操作过程只需数分钟
• 结果准确:不受结合抗体的影响,可真实地反映印迹膜上固定的全部蛋白的相对量
产品组分(约50次30 CM2蛋白转介膜检测用量)
| 试剂名称 | 总量 | 备注 |
| Membrane Staining Buffer A | 27.5 ml | 使用前向A、B试剂瓶中各添加22.5 ml甲醇,使终体积达到50 ml |
| Membrane Destaining Buffer B | 27.5 ml x 2 |
保存条件
室温密闭保存,有效期一年;加入甲醇后需避免与明火接触
使用方法
1.按常规操作进行蛋白电泳、转膜和Western blot
2.在染色容器内加入10 ml Membrane Staining Buffer A
3.将印迹膜完全浸入染色液中约15秒钟
4.将印迹膜转移到20 ml Membrane Staining Buffer B中,振荡数分钟,至蛋白条带呈现,背景变为淡蓝色
5.用去离子水冲去印迹膜上多余的脱色液,阴干后可长期保存
应用实例
使用StarSignal Chemiluminescent Assay Kit (Cat. No.
E171-01)检测目的蛋白条带的X-光片曝光结果
使用Fast Membrane Staining Kit(Cat. No. E176-01)对相应的印迹膜进行染色的结果