Bradford蛋白质定量试剂盒系根据Bradford染料结合原理,利用考马斯亮蓝G-250染料可与蛋白质结合(主要结合碱性或芳香族氨基酸残基),形成蓝色复合物的特性,通过测定样品在595 nm波长下的吸光值,并同BSA标准品所绘制的定量标准曲线做比对,即可计算出待测样品的蛋白质浓度。该方法可测定分子量在3000以上的多数蛋白和多肽浓度,具有灵敏度高、操作简便、快速、价格低廉等特点,是目前实验室最常用的蛋白质粗略定量方法。由于Bradford测定法会受样品中的一些试剂,特别是去垢剂的干扰(见下表),故使用时应先排除干扰因素。
用途
| 成分 | 总量 | 保存条件 |
| 5x Bradford Assay Reagent | 100 ml(约500次标准法) | 4℃或室温保存一年 |
| BSA Standard(10 mg/ml) | 2 ml | -20℃保存一年;4℃保存6个月 |
| 化学物质 | 可接受浓度* | 化学物质 | 可接受浓度* | 化学物质 | 可接受浓度* |
| β-mercaptoethanol | 1 M | SDS | 0.1 % | HEPES | 0.1 M |
| DTT | 5 mM | Triton X-100 | 0.1 % | Tris | 2 M |
| NH4SO4 | 1 M | Tween-20,60,80 | 0.015 % | NaCl | 5 M |
| MgCl2 | 1 M | Urea | 6 M | KCl | 1 M |
*可接受浓度指的是Bradford试剂稀释前样品中的试剂浓度
注:表中所示为文献报道的数据,不排除上述试剂在可接受浓度内会对某些蛋白的测定产生影响。

BCA(Bicinchoninic Acid)蛋白浓度检测法是目前常用的蛋白质定量方法之一。BCA测定方法的原理与Lowry法相似,利用Cu2+在碱性条件下,可以被蛋白质还原成Cu+,Cu+与BCA试剂结合形成紫色的络合物的特性,通过测定样品在562 nm波长下的吸光值,并同蛋白标准曲线对比,即可计算出待测样品的蛋白浓度。BCA法与Lowry法相比,操作更为简便,稳定性更好。该方法还具有反应产物稳定、灵敏度高、线性范围广、对不同种类蛋白质检测的变异系数小、对去垢剂耐受性好等特点,特别适合于微量测定。
用途
| 成分 | 总量 | 保存条件 |
| BCA Reagent A | 100 ml(约100次标准法) | 4℃或室温保存一年 |
| BCA Reagent B | 2 ml | |
| BSA Standard(2 mg/ml) | 1 ml | -20℃保存一年 |
| 方法 | Bradford | BCA | ||
| 比色杯法 | 96孔板法 | 比色杯法 | 96孔板法 | |
| 标准测定法(高浓度) | ||||
| 蛋白样品体积 | 20 μl | 10 μl | 100 μl | - |
| 线性范围 | 100~1000 μg/ml | 40~500 μg/ml | 25 ~2500 μg/ml | - |
| 微量测定法(低浓度) | ||||
| 蛋白样品体积 | 800 μl | 160 μl | - | 20 μl |
| 线性范围 | 1~20 μg/ml | 1~20 μg/ml | - | 5 ~250 μg/ml |
| 最少温育时间(min) | 5 | 5 | 30 | 30 |
| 测定波长(nm) | 595 | 595 | 540~595 | 540~595 |
| 原理 | Bradford(1976) | Bradford(1976) | Lowry(1951) | Lowry(1951) |