单StarMut Site-directed Mutagenesis Kit采用反向PCR (Inverse PCR) 技术，对含有目标基因的双链环状质粒进行扩增，直接导入突变序列，从而实现个或多个邻近碱基的置换(substitution)、缺失(deletion)或插入(insertion)。该技术的原理如图所示。首先以甲基化的质粒DNA为模板，使用人工合成含有目的突变碱基的引物进行扩增反应，然后用DpnI限制性内切酶消化不含突变的质粒模板，再进行转化和筛选。

本试剂盒使用的StarMut Enzyme及其配套buffer能够最大限度地保持扩增质粒的保真性，对引物设计的要求相对宽松、灵活，最多可实现21个连续碱基的插入或删除，适用于≤6 kb质粒的点突变。该方法操作简单快捷，突变阳性率高，严格按说明书操作，6个以下连续碱基的突变率可达90%以上。

StarMut Site-directed Mutagenesis Kit的原理和操作流程示意图

用途
• 6 kb以下质粒的单个或多个邻近碱基的置换（Substitution）、缺失（Deletion）、或插入（Insertion）

特点

• 操作简单：采用一步PCR法，不需要磷酸化引物，不需要连接反应，不需要特殊菌株
• 阳性率高：6个以下连续碱基的突变率可达90%以上
• 质控对照：提供Control Plasmid和Control Primers，通过X-gal琼脂平板呈色变化监控反应各组分的性能
• 提供针对高GC模板的High-GC Additive

本产品是StarMut Site-directed Mutagenesis Kit（Cat. No. T111-01）的升级产品，采用保真性能和扩增效率俱佳的StarMut XL Enzyme，能够快速扩增15 kb以下的质粒DNA，最大限度地降低非目的突变的发生率；其合成速度为15~30 sec/1 kb，大大缩短了反应时间。该方法操作简单快速，突变阳性率高，对引物设计的要求相对宽松、灵活。严格按说明书操作，6个以下连续碱基的突变率可达90%以上，最多可实现21个连续碱基的插入或删除。通过与T4 DNA连接酶联合使用，本试剂盒可实现更长片段的插入或删除。

用途
·  15 kb以下质粒的单个或多个邻近碱基的置换(substitution)、缺失(deletion)、或插入(insertion)

特点
· 高效快速：采用极高保真性能和极高扩增效率的DNA聚合酶，10 kb质粒突变反应最多只需2.5小时
· 操作简单：采用一步PCR法，不需要磷酸化引物，不需要连接反应，不需要特殊菌株
· 阳性率高：6个以下连续碱基的突变率可达90%以上
· 质控对照：提供Control Plasmid和Control Primers，通过X-gal琼脂平板呈色变化监控反应各组分的性能

定点突变是一种广泛应用的分析蛋白和DNA的非常有力的工具。普通的定点突变试剂盒通常是基于反向PCR技术，采用高保真耐热DNA聚合酶和互补的突变引物向目的基因引入单个碱基或多个邻近碱基的突变、缺失、或插入。当遇到多个位点突变的需求时，利用单点突变试剂盒只能对目标位点逐一引入突变，耗时费力。

StarMut Multi Site-directed Mutagenesis （MSDM）Kit突破了传统的定点突变方法，只需要一步PCR反应，即可引入多个目标突变，操作简单快捷，突变阳性率高。该试剂盒针对单个目标突变只采用一条磷酸化的突变引物，利用StarMut MSDM Enzyme的耐热DNA聚合酶活性合成与模板互补的带有突变的的DNA链，然后通过该酶的连接酶活性修复突变DNA链之间的缺刻（nicks），使其连接成为一条与模板互补的突变单链DNA。经过多个PCR循环反应后，带有多个特定突变的DNA链成倍增长，经过DpnI限制性内切酶消化不含突变的质粒模板，环化的单链突变DNA可直接进行转化，通过DNA测序或限制性内切酶消化等方法筛选出目标突变质粒。本试剂盒适用于≤6 kb质粒的多点突变，根据质粒性质不同，最多可引入5个独立位点的突变、插入或删除。

用途

研究突变对蛋白功能或结构的影响

蛋白药物、基因工程酶的定向进化

特点

· 操作简便：不需要磷酸化引物，不需单独的连接反应，不需要特殊菌株

随机突变是阐述蛋白质结构和功能之间的关系、改进蛋白质性能的重要工具。StarMut随机突变试剂盒基于易错PCR (error-prone PCR) 技术，利用Taq DNA polymerase不具有3′→5′校对功能的特性，在特定的反应缓冲体系中，向扩增的目的基因中引入随机突变密码子。带有随机突变的扩增产物通过双酶切，连接到表达载体中构建文库，然后转化入表达宿主中，进行蛋白活性筛选。如果经一次突变反应不能获得满意的结果，可采用连续易错PCR (sequential error-prone PCR)策略，即将一次PCR扩增得到的有用突变基因作为下一次PCR扩增的模板，连续反复地进行随机诱变，使每一次获得的突变累积而产生更有意义的突变。

本公司生产的StarMut Random Mutagenesis Kit包含有优化的2 x StarMut Random System、 StarMut Enhancer和ddH2O三种组分，操作简便快速，使用时只需加入DNA模板和合成的带有双酶切位点的两条引物，并用水补足体积，即可进行扩增。2 x StarMut Random System含有优化浓度的Taq DNA polymerase、 dNTPs、 Mg2+和GenStar公司独有的反应buffer，可最大限度地克服其他试剂盒以G和C突变为主的缺点，大大减少突变碱基的偏爱性和终止密码子的引入，获得相对均衡的突变谱。 StarMut Enhancer用于增加扩增突变率。
用途
• 6 kb以下质粒的多个非邻近位点的碱基置换（ substitution）、缺失（ deletion）、或插入（ insertion）
特点
• 操作简便：采用优化的预混体系，减少多次加样可能造成的出错机会和污染机会
• 错配率可灵活掌握

产品组分

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