StarScript II First-strand cDNA Synthesis Kit

StarScript II First-strand cDNA Synthesis Kit(cDNA第一链合成试剂盒)是专为两步法RT-PCR第一步实验设计的高灵敏度RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly(A) mRNA合成第一链cDNA，并能够通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。该试剂盒使用重组表达的StarScript Reverse Transcriptase (RNase H－)，通过定点突变去除了RNase H的活性，并增加了该酶与模板－引物的亲和力，具有更好的热稳定性，因此其DNA聚合酶的活性和持续合成能力均高于野生型M-MLV反转录酶，合成的cDNA产量更多、更长，最长可合成15 kb的cDNA。本试剂盒含有第一链cDNA合成所需的全部试剂，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种耐热DNA聚合酶。

用途
·  cDNA第一链合成
·  引物延伸
特点
· 方便快捷：试剂盒包含反转录所需的全部试剂
· 超强延伸能力：合成的cDNA长度超过4 kb；对具有复杂二级结构的RNA模板，也能在42℃标准反应温度下进行反转录，避免RNA在高温下降解
· 高灵敏度：可对极少量的RNA模板进行良好的反转录反应
· 批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测
产品组分
以20 μl体系处理5 μg RNA为一个标准反应

质量控制
·  SDS-PAGE电泳检测纯度≥95%
·  无RNA酶、DNA酶污染

FAQ:
Q1: 反转录成功的前提条件是什么？
A1: 实验操作中避免RNase污染以及高质量的RNA模板对cDNA合成的成功率起着决定性作用。
Q2： 进行反转录前是否有必要对提取的RNA样品进行DNA酶处理？
A2： 所有的提取方法都不能完全去除基因组DNA，应根据RNA样品的纯度和实验本身的要求决定是否需要进行DNA酶
处理。微量基因组DNA污染对常规的Northern blot，基因克隆等实验影响不大，但应设立无RTase阴性对照，并对
扩增片段进行测序以确保序列正确。对于敏感度高的RT-PCR，特别是实时定量RT-PCR检测，则有必要进行DNA酶
处理，具体步骤如下：
1）在DNase， RNase-free离心管中加入下列试剂：
RNA 2-5 µg
10× DNase I Buffer 1 µl
DNase I（RNase-free）（2 U/µl） 0.5 µl （Cat. No. A216-01）
RNase Inhibitor（RNasIn） 0.25 µl （Cat. No. A218-01）
DEPC-ddH2O 补足至10 µl
2）混匀，短暂离心， 37oC放置30分钟；
3）加入0.25 µl 150 mM EDTA， 65oC放置15分钟使DNase I失活。
Q3： 后续PCR体系中使用多少反转录产物为宜？
Q3： 反转录产物在后续PCR体系中的体积应不超过10%。如需使用较多的反转录产物，可用酚/仿抽提法纯化、浓缩反
转录产物。
应用实例

StarScript II First-strand cDNA Synthesis Mix

本产品是专为两步法RT-PCR第一步实验设计的高灵敏度反转录反应预混体系，可以从极低量的总RNA或poly(A) mRNA合成第一链cDNA，无需额外添加RNase抑制剂,合成的cDNA产量更高，长度可达15 kb。使用方便，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种耐热DNA聚合酶。

【用途】 

• RT-PCR检测
• 全基因克隆、测序

【特点】

• 超强延伸能力：适合较长基因或具有复杂二级结构基因的合成
• 高度灵敏：可对极少量的RNA模板进行良好的反转录反应
• 批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测
• TA克隆：产物带3· 突出A碱基，可直接进行TA克隆实验
 【产品组分】

－20℃恒温保存一年

【注意事项】

1. 实验过程中请注意避免RNase污染。
2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。建议使用GenStar
TRIGene总RNA提取试剂 (货号P118-01) 制备高质量的RNA模板，并设置反转录反应阳性对照。
4. 由于所有的RNA提取方法都不能完全去除基因组DNA，所以应根据后续实验的需求，选择是否需要在反转录反应前去
除残留基因组DNA。 RNase-free DNase I (货号A216-01) 处理的具体方法见本说明书附录。
5. StarScript II RT Mix以RNA为模板获得全长的第一链cDNA，其起始位点由所用引物所决定：
1) 随机引物 (Random Primer) 在RNA模板上没有特异性结合位点，所有RNA都可以做为第一链cDNA合成的模板；
2) Oligo dT Primer只能以poly(A) mRNA作为cDNA合成的模板；
3) 采用序列特异性引物 (GSP) 以其结合位点为起始位点。
6. StarScript II RT Mix合成的第一链cDNA产物可直接加入PCR反应混合物中进行扩增，但加入体积不应超过PCR反应总体
系的10%，否则影响目的片段的产量。 PCR扩增使用的耐热DNA聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、 GC含
量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。
7. 第一链cDNA合成产物经过处理后可作为第二链合成的模板，合成含各种标记的cDNA，作为杂交实验的探针。
8. RNA可置于-70℃以下长期保存， cDNA合成产物可置于-20℃保存。

StarScript II Two-step RT-PCR Kit

本产品是高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly（A）mRNA中高效率地合成第一链cDNA，并能够通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。该试剂盒使用重组表达的StarScript II MMLV Reverse Transcriptase（RTase），通过多重定点突变去除了RNase H的活性（RNase H－），并增加了该酶与模板－引物的亲和力，具有更好的热稳定性，因此其DNA聚合酶的活性和持续合成能力均高于野生型M-MuLV RTase，合成的cDNA产量更多、更长。本试剂盒中的2×HiFiTaq PCRStarMix含PCR反应所需的HiFiTaq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分，并对体系进行了优化，能有效扩增10 kb以下片段，与StarScript II RTase配合使用，扩增效果稳定可靠、使用快速简便。

用途
• RT-PCR检测
• 全基因克隆、测序

特点
• 超强延伸能力：适合较长基因或具有复杂二级结构基因的合成
• 高度灵敏：可对极少量的RNA模板进行良好的反转录反应
• 批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测
• TA克隆：产物带3· 突出A碱基，可直接进行TA克隆实验

产品组分

保存条件
-20℃恒温保存一年

StarScript II One-step RT-PCR Kit

StarScript II One-step RT-PCR Kit是高效合成和扩增的一步法RT-PCR试剂盒，用于以RNA为模板，通过特异引物合成cDNA之后，在DNA聚合酶的作用下通过PCR技术检测目标基因的含量。本产品为一管化设计，反转录和PCR反应均在一个反应体系中完成。反应产物可以直接电泳检测。

本产品包含了cDNA合成以及PCR反应所必须的酶和反应体系，优化的Buffer体系最大程度的减少了反转录酶对扩增反应的抑制，提高了反应整体的敏感性。

【用途】

• RT-PCR检测
• 全基因克隆、测序

【特点】

• 优化的预混体系（包含cDNA合成及PCR反应所必须的酶和反应体系）
• 一管化设计，反转录和PCR反应均在一个反应体系中完成
• 采用GenStar HotstartTaq热启动酶，能有效减少引物二聚体和杂扩增的产生
• 批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测

【产品组分】

 【保存条件】

-20℃恒温保存一年

【注意事项】

1. 实验过程中请注意避免RNase污染。
2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。建议使用GenStar
TRIGene总RNA提取试剂 (货号P118-05) 制备高质量的RNA模板。
4. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于65-70度加热5-10 min后再加入体系。